Home
Luận văn - báo cáo
Khoa học tự nhiên
ÁP DỤNG KĨ THUẬT REAL-TIME PCR SỬ DỤNG DISPLACING PROBE ĐỂ CHẨN ĐOÁN VIRUS HBV KHÁNG THUỐC LAMUVIDINE Ở BỆNH NHÂN VIÊM GAN SIÊU VI B
ÁP DỤNG KĨ THUẬT REAL-TIME PCR SỬ DỤNG DISPLACING PROBE ĐỂ CHẨN ĐOÁN VIRUS HBV KHÁNG THUỐC LAMUVIDINE Ở BỆNH NHÂN VIÊM GAN SIÊU VI B
ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP. HỒ CHÍ MINH
BỘ MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC
WX
Chủ đề:
ỨNG DỤNG KĨ THUẬT REAL-TIME PCR SỬ
DỤNG DISPLACING PROBE ĐỂ CHẨN ĐOÁN
HIỆN TƯỢNG VIRUS HBV KHÁNG THUỐC
LAMUVIDINE Ở BỆNH NHÂN MẮC BỆNH VIÊM
GAN SIÊU VI B
Sinh viên thực hiện: Đỗ Hữu Nhật Giảng Viên: Nguyễn Ngọc Hải
Lớp: DH06SH
Mã số sinh viên: 06126104
Tp. Hồ Chí Minh, tháng 10/20
Đặt vấn đề:
Mặc dù chương trình tiêm ngừa vi rút viêm gan B (HBV) đã làm giảm đáng kể tỷ lệ bệnh
viêm gan do vi rút B, nhưng HBV vẫn còn là một “tên sát nhân giấu mặt” vì đôi khi triệu
chứng của bệnh rât mơ hồ làm cho ta lầm tưởng với một trường hợp rối loạn tiêu hóa hay gặp,
và đa số trường hợp không có triệu chứng lâm sàng ở những trường hợp viêm gan vi rút B
mãn tính mà chỉ có xét nghiệm máu chúng ta mới chẩn đoán được bệnh. Do đó, vai trò của xét
nghiệm trong chẩn đoán viêm gan do vi rút B giữ một vai trò cực kỳ quan trọng. Có nhiều loại
xét nghiệm khác nhau được sử dụng trong chẩn đoán viêm gan virus HBV, mỗi loại có một ý
nghĩa khác nhau tùy vào từng giai đoạn của bệnh mà người bác sĩ sẽ lựa chọn xét nghiệm
thích hợp.
Có 5 xét nghiệm hay được dùng trong chẩn đoán, đánh giá vi rút viêm gan siêu vi B
trước đây là HBsAg, AntiHBs, HBeAg, AntiHBe, AntiHBc IgM và AntiHBc IgG. Các xét
nghiệm này là những xét nghiệm cơ bản, dùng phương pháp miễn dịch để phát hiện nhưng
vẫn có một số hạn chế.
Vào những năm cuối thế kỷ 20, kỹ thuật sinh học phân tử ra đời và có tốc độ phát
triển nhanh chóng, đặc biệt là kĩ thuật PCR mà điển hình là Real-time PCR đã mở ra một kỷ
nguyên mới về chẩn đoán gen nên chúng ta đã có thể chẩn đoán được vi rút viêm gan B ở mức
độ phân tử (Đó là các xét nghiệm phân tích trên phân tử di truyền của HBV là DNA). Nhờ ứng
dụng các kỹ thuật về phân tích DNA của HBV mà chúng ta có thể giải quyết được các hạn chế
của các kỹ thuật miễn dịch kinh điển cũng như phân tích DNA vi rút giúp chúng ta có những cơ
sở đánh giá tình trạng bệnh, khả năng diễn tiến của bệnh, theo dõi điều trị bệnh và lựa chọn
phương thuốc điều trị thích hợp.
I. TỔNG QUAN VỀ ĐỀ TÀI:
I..1 Tồng quan về virus HBV:
HBV thuộc loại siêu vi trùng (hay virus): Nhóm VII (dsDNA-RT) Họ (familia):
Hepadnaviridae. Chi (genus): Orthohepadnavirus. Loài(species):viêmganB.Có khả năng tồn
tại cao. HBV bền vững với nhiệt độ :100 độ C virut sống được 30', ở -20 độ C sống tới 20
năm, HBV kháng ete (eter), nhưng bất hoạt trong formalin(fócmon).
Cấu tạo của virus HBV cũng giống đại đa số các virus khác. Chúng có lớp vỏ ngoài
bằng protein, có chứa trên bề mặt nhiều kháng nguyên HBs, và cấu trúc DNA bên trong. HBV
là chủng virus duy nhất có cấu trúc DNA có khả năng lây truyền qua đường máu.
H1.1 Cấu trúc của virus HBv. Chuỗi DNA, Protein nhân HBc, Protein bề mặt HBs (phải)
Cấu trúc DNA của virus HBV là một chuỗi DNA có phần gập đôi khoảng 3,2 kbp.
Chứa các gene cần thiết cho quá trình xâm nhập, sinh sản cũng như gây bệnh. DNA của BBV
có khả năng bị đột biến cao khi lạm dụng thuốc điều trị, gây nên chứng kháng thuốc ở người
bệnh mãn tính.
H1.2 Cấu trúc bộ gene của virus HBV
Cơ chế xâm nhập và nhân bản: virus HBV sẽ bám trên tế bào chủ thông qua một
thụ thể trên màng tế bào. Sau đó bơm DNA vào trong tế bào chất. Tiếp đó, DNA cua virus sẽ di
chuyển vào nhân của tế bào chủ, sau đó nhân lên. Tiếp tục quá trình là sự phiên mã ra mRNA.
mRNA sẽ đi ra ngoài tế bào chất, tiến hành tổng hợp các protein cần thiết cho sự tạo thành virus
mới. Sau đó viruse sẽ thoát ra ngoài tế bào và tiếp tục chu trình mới.
H1.3 Cơ chế xâm nhập và nhân bản của HBV
I.2 Tổng quan về kĩ thuật Real Time PCR:
I.2.1 Định nghĩa:
Real Time PCR (RT PCR) là một kĩ thuật dùng để định lượng sự tích lũy
DNA ngay khi phản ứng khuếch đại đang xảy ra.
I.2.2 Nguyên lí hoạt động:
RT PCR có khả năng định lượng là nhờ sử dụng một loại phân tử phát huỳnh
quang có tên gọi là Probe. Probe là một đoạn DNA có gắn phân tử phát huỳnh quang. Máy luân
nhiệt có trang bị một bộ phận đặc biệt có khả năng nhận biết và đo lường các tín hiệu huỳnh
quang. Tín hiệu huỳnh quang được đo lường và được phân tích, từ đó phản ánh được lượng
DNA trong mỗi chu kỳ.
H1.4 Máy Real Time PCR
I.3 Thuốc điều trị Lamivudine:( tên biệt dược Zeffix )
Lamuvidine là thuốc điều trị HBV đặc hiệu. Nó có công thức cấu tạo C8H11N3O3S
(4-amino-1-[(2R,5S)-2-(hydroxymethyl)-1,3-oxathiolan-5-yl]-1,2-dihydropyrimidin-2-one).
H1.5 Công thức cấu tạo của Lamivudine. H1.6 Công thức cấu tạo 3D của Lamivudine.
Lamivudine thuộc nhóm thuốc Nucleosides analogues tức là nhóm có cấu trúc tương
tự tương tự Purine hay pyrimidine, nó làm ngăn chặn quá trình tổng hợp DNA của virus bằng
cách gắn kết vào DNA polymerase của Virus. Thuốc rất an toàn , dễ dung nạp và ít hại cho tế
bào. Tuy nhiên khả năng làm mất cccDNA thì không bền vững , vì vậy phải duy trì thuốc trong
thời gian dài.
Cơ chế tác động: Cơ chế tác động chủ yếu của Lamivudine bao gồm sự ức chế tổng
hợp DNA virus. Tác động này xảy ra chủ yếu qua sự kết hợp vào HBV DNA vừa mới tổng hợp,
gây kết thúc chuỗi tiến trình tổng hợp. Sự ức chế tương tranh trên DNA polymerase mã hóa
DHBV cũng đã được chứng minh. Lamivudine là một chất ức chế cạnh tranh yếu trên DNA
polymerase của tế bào người bệnh và không làm kết thúc chuỗi tổng hợp DNA của tế bào người
bệnh. Lamivudine không ức chế trực tiếp sự tổng hợp protein của virus, tuy nhiên việc giảm
tổng hợp protein virus là hậu quả của sự ức chế tổng hợp DNA virus. Nhất quán với cơ chế này,
việc giảm HBeAg và HBsAg trong huyết thanh ở bệnh nhân xảy ra chậm hơn nhiều so với giảm
virus trong máu.( HbeAg: kháng nguyên nội sinh nếu có trong máu bệnh nhân đang có khả năng
lây rất cao. HbsAg: kháng nguyên bề mặt thuộc lớp vỏ của HBV - dùng trong xét nghiệm máu
để biết có HBV trong cơ thể).
Zeffix cần có sự phosphoryl hóa nội bào để thể hiện tác động kháng virus. Vì vậy,
khả năng kháng virus của nó liên hệ chặt chẽ với hàm lượng Zeffix triphosphate sản sinh trong
tế bào nhiễm HBV. Khi ở trong các lympho bào máu ngoại vi, Zeffix được phosphoryl hóa
thành dẫn xuất 5'-triphosphate ở các tế bào.
I.4 Nguyên nhân hiện tượng kháng thuốc Lamivudine:
Việc lạm dụng thuốc điều trị, cũng như việc sử dụng thuốc lâu dài ở các bệnh nhân
viêm gan mãn tính gây ra hiện tượng kháng thuốc ở virus HBV. Đây là một hiện tượng nguy
có thể bạn quan tâm
Kiểm tra virus PMWaV-1 ở cây dứa Cayenne nhằm cung cấp cây giống sạch...
59
916
360
Thạc sĩ cao học
59
(New)
.png)
Bài thuốc chữa ho, viêm họng không dùng kháng sinh chỉ 3 ngày là khỏi
2
652
287
Bệnh thường gặp
2
(New)
Nghiên cứu về suy diễn dựa tình huống và ứng dụng nó trong việc xây dự...
0
733
377
Thạc sĩ cao học
(New)
Phân lập được chủng vi khuẩn Bacillus subtilis từ đất có khả năng đối...
73
799
360
Khoa học tự nhiên
73
(New)
BÁO CÁO SỐ LƯỢNG THUỐC PHẢI KIỂM SOÁT ĐẶC BIỆT ĐÃ SỬ DỤNG PHỤC VỤ KHÁM...
1
970
329
Biểu mẫu, văn bản khác
1
(New)
Phát hiện CMV (Cucumber Mosaic Virus), TMV (Tobacco Mosaic Virus) tron...
69
734
407
Khoa học tự nhiên
69
(New)
Ý dĩ, gạo lức, hạnh nhân là những vị thuốc tốt cho người bệnh viêm phế...
2
857
296
Sống khỏe
2
(New)
Nghiên cứu các phương pháp suy diễn mờ dựa trên độ đo các giá trị tham...
178
929
252
Kỹ thuật
178
(New)
thông tin tài liệu
Mặc dù chương trình tiêm ngừa vi rút viêm gan B (HBV) đã làm giảm đáng kể tỷ lệ bệnh viêm gan do vi rút B, nhưng HBV vẫn còn là một “tên sát nhân giấu mặt” vì đôi khi triệu chứng của bệnh rât mơ hồ làm cho ta lầm tưởng với một trường hợp rối loạn tiêu hóa hay gặp, và đa số trường hợp không có triệu chứng lâm sàng ở những trường hợp viêm gan vi rút B mãn tính mà chỉ có xét nghiệm máu chúng ta mới chẩn đoán được bệnh. Do đó, vai trò của xét nghiệm trong chẩn đoán viêm gan do vi rút B giữ một vai trò cực kỳ quan trọng. Có nhiều loại xét nghiệm khác nhau được sử dụng trong chẩn đoán viêm gan virus HBV, mỗi loại có một ý nghĩa khác nhau tùy vào từng giai đoạn của bệnh mà người bác sĩ sẽ lựa chọn xét nghiệm thích hợp.
Mở rộng để xem thêm
tài liệu mới trong mục này
Tạo chủng Rhodococcus opacus B4 có biểu hiện của enzyme n- alkane monooxygenase tăng so với dòng chƣa biến nạp, bằng cách tạo plasmid chứa gene alkB1/alkB2 rồi chuyển plasmid đó vào R. opacus B4
Khảo sát tỉ lệ nhiễm Coliforms và E. coli trong nƣớc uống, nước giải khát có gas, nước uống có cồn đang lƣu hành trên địa bàn Thành phố Hồ Chí Minh.
Sản xuất được chế phẩm diệt ruồi hiệu quả mà không gây độc đối với con ngƣời và thân thiện với môi trường
Nghiên cứu mới để bảo vệ vi khuẩn probiotic và nâng cao giá trị của sữa chua về chỉ tiêu vi sinh vật.
Sản xuất kháng thể thỏ kháng ovalbumin và tinh chế kháng thể (IgG) kháng ovalbumin
tài liệu hot trong mục này
tài liệu giúp tôi
Nếu bạn không tìm thấy tài liệu mình cần có thể gửi yêu cầu ở đây để chúng tôi tìm giúp bạn!
xem nhiều trong tuần
Giáo trình Quản trị học của Đại học kinh tế quốc dân
Tâm lý xã hội VÀ Hệ tư tưởng
Mẫu slide chủ đề âm nhạc
4 đề thi học sinh giỏi Toán lớp 2, có đáp án kèm theo
Tham khảo 12 bài tập nguyên lý thống kê có lời giải
Các hiệu ứng HTML cho trang web
yêu cầu tài liệu
Giúp bạn tìm tài liệu chưa có
×
