DANH MỤC TÀI LIỆU
Khóa luận: Thiết lập qui trình tinh sạch enzyme bromelain từ thân dứa bằng phƣơng pháp sắc ký trao đổi ion và đông khô sản phẩm ở quy mô nhỏ
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO
TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP. HỒ CHÍ MINH
BỘ MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC
***000***
KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP
TINH SẠCH ENZYME BROMELAIN TỪ THÂN DỨA
(Ananas comosus (L.) Merr.) BẰNG PHƢƠNG PHÁP
SẮC KÝ TRAO ĐỔI ION
NGÀNH: CÔNG NGHỆ SINH HỌC
NIÊN KHÓA: 2002 – 2006
SINH VIÊN THỰC HIỆN: NGUYỄN THANH ĐIỀN
Thành phố Hồ Chí Minh
2006
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO
TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH
BỘ MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC
TINH SẠCH ENZYME BROMELAIN TỪ THÂN DỨA
(Ananas comosus (L.) Merr.) BẰNG PHƢƠNG PHÁP
SẮC KÝ TRAO ĐỔI ION
GVHD: TS. BÙI MINH TRÍ SVTH: NGUYỄN THANH ĐIỀN
Thành phố Hồ Chí Minh
2006
iii
LỜI CẢM ƠN
Xin chân thành cảm ơn:
- Ban Giám Hiệu trƣờng Đại học Nông Lâm Tp. Hồ Chí Minh đã tạo mọi điều kiện
cho tôi trong suốt thời gian học tập.
- Các Thầy trong Bmôn ng Nghệ Sinh Học cùng các Thầy Cô đã trực tiếp
giảng dạy trong suốt bốn năm qua.
- TS. Bùi Minh Trí đã tận tình hƣớng dẫn, dìu dắt và động viên em trong thời gian
thực hiện đề tài tốt nghiệp.
- Th.S Trần Nhật Phƣơng, Th.S Dƣơng Thị Hƣơng Giang đã dành cho em nhiều
sự hỗ trợ cần thiết và cung cấp nhiều kiến thức quy báu.
- Th.S Huỳnh Văn Biết, KS. Hồ Bích Liên, KS. Hồ Viết Thế đặc biệt KS.
Hồng Phát đã theo sát, tận tình giúp đỡ em vƣợt qua những khó khăn trong quá
trình thực hiện đề tài.
- Các anh chị phụ trách phòng CNSH thuộc Trung m Phân Tích Thí Nghiệm
Đại học Nông Lâm Tp. HCM.
- Phòng Công Nghệ Enzyme-Viện Công Nghệ Sinh Học – Đại Học Cần Thơ.
- Cùng toàn thể lớp CNSH 28 thân thiện đã hỗ trợ, giúp đỡ động viên tôi trong
suốt thời gian làm đề tài.
Thành kính ghi ơn ba mẹ cùng những ngƣời thân trong gia đình luôn tạo điều kiện
và động viên con trong suốt quá trình học tập tại trƣờng.
Tháng 08 năm 2006
Nguyễn Thanh Điền
iv
TÓM TẮT
NGUYỄN THANH ĐIỀN, Đại học Nông Lâm Tp. Hồ Chí Minh. Tháng 08/2006.
TINH SẠCH ENZYME BROMELAIN TỪ THÂN DỨA (Ananas comosus (L.) Merr.)
BẰNG PHƢƠNG PHÁP SẮC KÝ TRAO ĐỔI ION
GVHD: TS. BÙI MINH TRÍ
Bromelain thân (EC 3.4.22.33) một trong các enzyme cystein proteinase đƣợc tìm
thấy nhiều nhất trong dứa (Ananas comosus (L.) Merr.). Các enzyme y đƣợc áp
dụng rộng rãi trong công nghiệp trong y dƣợc. Bromelain ba hoạt tính khác
nhau: peptidase, amidase, esterase. Trong đó đặc biệt bromelain thân thphân hủy
cả cơ chất tự nhiên lẫn cơ chất tổng hợp. Chúng là enzyme có giá trị kinh tế và hầu hết
sản phẩm bromelain thƣơng mại đƣợc ly trích từ thân dứa. Do đó yêu cầu bức thiết
đƣợc đặt ra là cần có một sản phẩm bột bromelain tinh sạch thuận lợi cho sử dụng, vận
chuyển, tồn trữ. Những kết quả nghiên cứu bƣớc đầu trong tinh sạch bromelain từ thân
dứa cho thấy enzyme này có thể đƣợc tủa bằng acetone, tinh sạch bằng sắc ký trao đổi
ion trên cột trao đổi cation UNO-S đông khô bằng máy Lyopro 6000. Từ 97 gam
thân dứa nhận đƣợc 50 ml dịch, sau khi tủa bằng acetone thu đƣợc 9 ml dịch tủa, sau
khi qua cột sắc nhận đƣợc 108 ml dịch enzyme tinh khiết với nồng độ 0,53
mg/ml (chiếm 11,7 % protein tổng số), hiệu suất thu hồi hoạt tính 65,65 %. cuối
cùng đông khô sản phẩm nhận đƣợc 4,6 gam bột bromelain với hàm lƣợng hoạt
tính enzyme nguyên vẹn sau 4 tuần nếu giữ -20oC. Kiểm tra qua SDS-PAGE cho
thấy sản phẩm bromelain có độ tinh sạch cao.
v
SUMMARY
NGUYEN THANH DIEN, Nong Lam University of Ho Chi Minh City. August, 2006.
PURIFICATION OF BROMELAIN ENZYME FROM PINEAPPLE STEM (Ananas
comosus (L.) Merr.) BY ION CHROMATOGRAPHY
Stem bromelain (EC 3.4.22.33) is the most abundant enzyme among cystein proteinases
found in the stem of pineapple (Ananas comosus (L.) Merr.). These enzymes widely used
in various industrial and medical applications. Bromelain has three different activities:
peptidase, amidase, esterase. Among those, stem bromelain can hydrolyze natural
substance as well as synthetic substance. In the market, almost commercial enzyme
products are extracted from stem bromelain. For commercializing, it is important to
produce is fine powder bromelain product that is easy to use, transport, and store.
Preliminary study on purification of bromelain from pineapple stem showed that this
enzyme could be precipitated by acetone, purified by cation exchange chromatoghraphy
on UNO-S column and freeze-dried by Lyopro 6000 machine. 50 ml solution was
obtained from 97 gr pineapple stem, then 9 ml precipitated solution achieved after acetone
precipitation, and bromelain solution achieved after chromatography was 108 ml enzyme
with the concentration of 0,53 mg/ml (11,7 % of total protein), and the recovery activity
was 65,65 %. After freeze-dried process, we achieved 4,6 gr purified fine powder
bromelain that remained activity after at least 4 weeks in -20oC. SDS-PAGE showed that
the bromelain product was well purified.
vi
MỤC LỤC
Nội dung Trang
LỜI CẢM ƠN ..................................................................................................................... iii
TÓM TẮT ........................................................................................................................... iv
SUMMARY..........................................................................................................................v
MỤC LỤC .......................................................................................................................... vi
DANH SÁCH CÁC BẢNG .................................................................................................x
DANH SÁCH CÁC HÌNH VÀ SƠ ĐỒ ............................................................................. xi
PHẦN 1. MỞ ĐẦU .............................................................................................................1
1.1. Đặt vấn đề ................................................................................................................................. 1
1.2. Mục tiêu của đề tài ................................................................................................................... 2
1.3. Mục đích ................................................................................................................................... 2
1.4. Giới hạn của đề tài .................................................................................................................... 2
1.5. Nội dung thực hiện ................................................................................................................... 2
PHẦN 2. TỔNG QUAN TÀI LIỆU ....................................................................................3
2.1. Giới thiệu sơ lƣợc về cây dứa ................................................................................................... 3
2.2. Giới thiệu về enzyme................................................................................................................ 5
2.2.1. Sơ lƣợc về enzyme ............................................................................................................ 5
2.2.1.1. Định nghĩa về enzyme .................................................................................................. 5
2.2.1.2. Phân loại enzyme ......................................................................................................... 5
2.2.1.3. Sự khác nhau về chất lƣợng enzyme và thị trƣờng enzyme công nghiệp .................... 7
2.2.2. Các yếu tố ảnh huởng đến vận tốc phản ứng enzyme. ...................................................... 8
2.2.2.1. Ảnh hƣởng của nồng độ enzyme .................................................................................. 8
2.2.2.2. Ảnh hƣởng của nồng độ cơ chất................................................................................... 8
2.2.2.3. Ảnh hƣởng của nhiệt độ ............................................................................................... 8
2.2.2.4. Ảnh hƣởng của pH ....................................................................................................... 9
2.3. Enzyme Protease ...................................................................................................................... 9
2.3.1. Giới thiệu sơ lƣợc các enzyme protease .......................................................................... 10
2.3.1.1. Protease vi sinh vật ..................................................................................................... 10
2.3.1.2. Protease động vật ....................................................................................................... 10
2.3.1.3. Protease thực vật ........................................................................................................ 10
thông tin tài liệu
Bromelain thân (EC 3.4.22.33) là một trong các enzyme cystein proteinase đƣợc tìm thấy nhiều nhất trong dứa (Ananas comosus (L.) Merr.). Các enzyme này được áp dụng rộng rãi trong công nghiệp và trong y dƣợc. Bromelain có ba hoạt tính khác nhau: peptidase, amidase, esterase. Trong đó đặc biệt bromelain thân có thể phân hủy cả cơ chất tự nhiên lẫn cơ chất tổng hợp. Chúng là enzyme có giá trị kinh tế và hầu hết sản phẩm bromelain thương mại đƣợc ly trích từ thân dứa. Do đó yêu cầu bức thiết đƣợc đặt ra là cần có một sản phẩm bột bromelain tinh sạch thuận lợi cho sử dụng, vận chuyển, tồn trữ. Những kết quả nghiên cứu bƣớc đầu trong tinh sạch bromelain từ thân dứa cho thấy enzyme này có thể đƣợc tủa bằng acetone, tinh sạch bằng sắc ký trao đổi ion trên cột trao đổi cation UNO-S và đông khô bằng máy Lyopro 6000. Từ 97 gam thân dứa nhận đƣợc 50 ml dịch, sau khi tủa bằng acetone thu đƣợc 9 ml dịch tủa, sau khi qua cột sắc ký nhận đƣợc 108 ml dịch enzyme tinh khiết với nồng độ là 0,53 mg/ml (chiếm 11,7 % protein tổng số), hiệu suất thu hồi hoạt tính 65,65 %. Và cuối cùng đông khô sản phẩm nhận đƣợc 4,6 gam bột bromelain với hàm lƣợng và hoạt tính enzyme nguyên vẹn sau 4 tuần nếu giữ ở -20oC. Kiểm tra qua SDS-PAGE cho thấy sản phẩm bromelain có độ tinh sạch cao.
Mở rộng để xem thêm
xem nhiều trong tuần
yêu cầu tài liệu
Giúp bạn tìm tài liệu chưa có

LÝ THUYẾT TOÁN


×