Home
Luận văn - báo cáo
Khoa học tự nhiên
Kiểm tra, đánh giá sự thay đổi cƣờng độ huỳnh quang của các ATP sensor này ở các nồng độ khác nhau của ATP bằng Spectrofluorometer
Kiểm tra, đánh giá sự thay đổi cƣờng độ huỳnh quang của các ATP sensor này ở các nồng độ khác nhau của ATP bằng Spectrofluorometer
1
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO
ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH
KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP
PHÁT TRIỂN CÁC FLUORESCENT ATP SENSOR
SỬ DỤNG TIỂU ĐƠN VỊ EPSILON CỦA PHÂN TỬ
F1-ATPASE/SYNTHASE VÀ CÁC BIẾN THỂ
CỦA GREEN FLUORESCENT PROTEIN
Ngành học: CÔNG NGHỆ SINH HỌC
Niên khoá: 2003-2007
Sinh viên thực hiện: HUỲNH NHẬT PHƢƠNG KIM
Thành phố Hồ Chí Minh
Tháng 9/2007
2
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO
ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH
**************************
KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP
PHÁT TRIỂN CÁC FLUORESCENT ATP SENSOR
SỬ DỤNG TIỂU ĐƠN VỊ EPSILON CỦA PHÂN TỬ
F1-ATPASE/SYNTHASE VÀ CÁC BIẾN THỂ
CỦA GREEN FLUORESCENT PROTEIN
Giáo viên hƣớng dẫn Sinh viên thực hiện
GS. TS. NOJI HIROYUKI HUỲNH NHẬT PHƢƠNG KIM
TS. IMAMURA HIROMI
TS. LÊ ĐÌNH ĐÔN
Thành phố Hồ Chí Minh
Tháng 9/2007
3
MINISTRY OF EDUCATION AND TRAINING
HO CHI MINH CITY, NONG LAM UNIVERSITY
**************************
THESIS FOR ENGINEERING DEGREE
DEVELOPMENT OF FLUORESCENT ATP SENSORS
BASED ON F1-ATPASE/SYNTHASE EPSILON SUBUNIT
AND GREEN FLUORESCENT PROTEIN VARIANTS
Instructors Student
Prof. NOJI HIROYUKI HUYNH NHAT PHUONG KIM
Dr. IMAMURA HIROMI
Dr. LE ĐINH ĐON
Ho Chi Minh city
September, 2007
iii
LỜI CẢM TẠ
Tôi xin chân thành cảm tạ:
Ban Giám hiệu trƣờng Đại học Nông Lâm Thành phố Hồ Chí Minh, Ban
Chủ nhiệm Bộ môn Công nghệ Sinh học, cùng quý Thầy Cô đã truyền đạt
kiến thức cho tôi trong suốt quá trình học tại trƣờng.
Quý Thầy Cô ở Bộ môn Công nghệ Sinh học, các cán bộ phòng Đào tạo,
phòng Quan hệ quốc tế trƣờng Đại học Nông Lâm Thành phố Hồ Chí Minh
đã tạo điều kiện cho tôi tham gia vào chƣơng trình trao đổi sinh viên ngắn
hạn (OUSSEP – Osaka University Short-term Student Exchange Program) tại
Đại học Osaka – Nhật Bản.
Uỷ ban Đối ngoại, Trung tâm Sinh viên Quốc tế Đại học Osaka đã hỗ trợ
tôi trong thời gian tham gia chƣơng trình OUSSEP.
Giáo sƣ Noji Hiroyuki, Tiến sĩ Imamura Hiromi (Đại học Osaka), Tiến sĩ
Lê Đình Đôn (Đại học Nông Lâm) đã hết lòng hƣớng dẫn, giúp đỡ tôi trong
suốt quá trình thực hiện khoá luận.
Các Tiến sĩ, nhân viên, sinh viên ở phòng thí nghiệm của Giáo sƣ Noji đã
giúp đỡ, động viên tôi trong quá trình thực tập tại đây.
Giáo sƣ Kitahama Hideko, phó Giáo sƣ Kondo Sachihiko cùng các nhân
viên Phòng Sinh viên Quốc tế, Đại học Osaka đã giúp đỡ, động viên tôi trong
quá trình học tập tại trƣờng.
Các bạn lớp Công nghệ Sinh học K29 đã giúp đỡ, chia sẻ những vui buồn
trong suốt quá trình học cũng nhƣ thực hiện khoá luận.
Sinh viên thực hiện,
Huỳnh Nhật Phƣơng Kim.
iv
TÓM TẮT KHOÁ LUẬN
Đề tài “Phát triển các fluorescent ATP sensor, sử dụng tiểu đơn vị Epsilon của phân tử
F1-ATPase/synthase và các biến thể của green fluorescent protein” đƣợc thực hiện tại
phòng thí nghiệm của Giáo sƣ Noji Hiroyuki, Institute of Scientific and Industrial Research
(ISIR), Đại học Osaka, Nhật Bản; thời gian từ tháng 10 năm 2006 đến tháng 8 năm 2007.
Trong đề tài này, các ATeam là phức hợp của CFP nối với tiểu đơn vị từ Escherichia
coli (EF1 ), Bacillus clausii (BCL ), Bacillus megaterium (BME ), Bacillus pseudofirmus
(BPF ) và monomeric Venus hoặc các circular permutated Venus, đƣợc tạo ra bằng kỹ thuật
sinh học phân tử. Theo kết quả đánh giá các cấu trúc này in vitro, BME có ái lực với ATP ở
mức millimole. Trong khi đó, BCL và BPF có ái lực với ATP trong khoảng vài trăm
micromole. Tuy nhiên, ATeam với EF1 và BPF có đáp ứng rất thấp với ATP. Nồng độ ATP
trong tế bào đƣợc cho là nằm trong khoảng dƣới millimole đến vài millimole nên các ATeam
với BME và BCL có thể đƣợc sử dụng để xác định nồng độ ATP trong tế bào sống. Trong
số các ATeam từ BME thì ATeam BME-cp173Venus là ATP sensor tốt nhất. ATeam này có
hằng số phân ly đối với ATP và Hill coefficient lần lƣợt là K’d = 3,36 và n = 2.04. ATeam
BCL-nVenus có hằng số phân ly đối với ATP K’d = 4,12.105 và Hill coefficient n = 2,2.
Song, ATeam này luôn tồn tại dƣới hai dạng: đơn phân tử và đa phân tử. Dạng đa phân tử có
ái lực rất thấp với ATP. Để loại bỏ hiện tƣợng đa phân tử, các đột biến thay thế amino acid
trong phân tử BCL nhƣ I9T/V42K/F67N/L78N, P85A, I9T/V42K/F67N/L78N/P85A đã
đƣợc thử nghiệm nhƣng không hiệu quả.
Qua các kết quả đạt đƣợc, ATeam BME -cp173Venus là sensor có thể đƣợc sử
dụng để chỉ thị nồng độ ATP trong tế bào sống ở mức millimole. Đối với các ATeam
từ BCL , cần nghiên cứu thêm để giải quyết vấn đề về sự kết dính của protein.
v
ABSTRACT
The thesis name is “Development of an ATP sensor based on ATP synthase epsilon
subunit and green fluorescent protein variants”. This thesis was carried out at the
laboratory of Professor Hiroyuki Noji, Institute of Scientific and Industrial Research
(ISIR), Osaka University, Japan; from October, 2006 to August, 2007.
In this study, I constructed ATeam with subunit from F1-ATPase/synthase of
Escherichia coli (EF1 ), Bacillus clausii (BCL ), Bacillus megaterium (BME ),
Bacillus pseudofirmus (BPF ) and monomeric Venus as well as circular
permutated Venuses. ATeams with BME and BCL showed fluorescence change
after addition of ATP and had affinity to millimolar and hundred micro molar ATP,
respectively, whereas ATeam with EF1 and BPF did not show significant
fluorescence change. ATeam BME-cp173Venus seems the best ATP sensor for
intracellular ATP among all constructs with BME The apparent dissociation
constant and Hill coefficient of ATeam MBE-cp173Venus and ATeam
BCL-nVenus are K’d = 3.36, n = 2.04 and K’d = 4.12.105, n = 2.2, respectively.
ATeam with BME was monomeric. In contrast, ATeam with BCL exited as
oligomeric and monomeric forms. The dynamic range of ATeam in oligomeric
form is smaller than that of ATeam in monomeric form. To solve the problem of
aggregation, mutations (I9T/V42K/F67N/L78N, P85A or
I9T/V42K/F67N/L78N/P85A) were introduced, but did not affect.
According to the results of this study, ATeam BME-cp173Venus is the most
potential ATP sensor for intracellular ATP detection. Aggregation problem of ATeam
with BCL still remains for future improvement.
có thể bạn quan tâm
Giới thiệu chung về hệ thống thông tin đa phương tiện, hệ thống tìm ki...
92
985
488
Kinh tế quản lý
92
(New)
Sự khác nhau giữa Kiểm toán và Soát xét ở điểm gì?
2
1.069
343
Kế toán, kiểm toán
2
(New)
Những điều cần biết về mmWave và Sub-6GHz, 2 băng tần khác nhau của mạ...
3
1.193
259
Tài liệu CNTT khác
3
(New)
So sánh được sự giống nhau và khác nhau giữa tế bào biểu bì vảy hành v...
3
1.740
324
Giáo án, bài giảng lớp 6
3
(New)
Khảo sát, đánh giá sự phân bố các chủng vi nấm Trichoderma trong các l...
60
736
569
Khoa học tự nhiên
60
(New)
Trình bày mô hình để giải quyết bài toán tổng hợp tin từ các nguồn khá...
66
635
295
Kinh tế quản lý
66
(New)
Phân biệt lãi suất tiền gửi và lãi suất tiền gửi tiết kiệm khác nhau đ...
0
878
320
Tài liệu tài chính - ngân hàng khác
(New)
Khảo sát và phân tích định lượng để tìm hiểu sự khác biệt của các yếu...
104
990
698
Thạc sĩ cao học
104
(New)
thông tin tài liệu
Adenosine 5’-triphosphate (ATP) là hợp chất cao năng quan trọng nhất, giữ vai trò cung cấp năng lượng trong mọi tế bào sống. Bởi vì trong phân tử ATP có hai liên kết phosphate cao năng, năng lƣợng tự do sẽ đƣợc giải phóng khi ATP bị thủy phân thành Adenosine 5’-diphosphate (ADP) và một phosphate vô cơ (Pi), hoặc Adenosine monophosphate (AMP) và pyrophosphate (PPi). Do đó, phần lớn các hoạt động sống nhƣ vận chuyển, hấp thu dinh dƣỡng, sinh tổng hợp các chất, phân chia tế bào … đều sử dụng ATP nhƣ nguồn năng lƣợng trực tiếp và tiện dụng. Tuy nhiên, việc đo lƣờng nồng độ ATP trong tế bào sống vẫn còn gặp nhiều khó khăn
Mở rộng để xem thêm
tài liệu mới trong mục này
Tạo chủng Rhodococcus opacus B4 có biểu hiện của enzyme n- alkane monooxygenase tăng so với dòng chƣa biến nạp, bằng cách tạo plasmid chứa gene alkB1/alkB2 rồi chuyển plasmid đó vào R. opacus B4
Khảo sát tỉ lệ nhiễm Coliforms và E. coli trong nƣớc uống, nước giải khát có gas, nước uống có cồn đang lƣu hành trên địa bàn Thành phố Hồ Chí Minh.
Sản xuất được chế phẩm diệt ruồi hiệu quả mà không gây độc đối với con ngƣời và thân thiện với môi trường
Nghiên cứu mới để bảo vệ vi khuẩn probiotic và nâng cao giá trị của sữa chua về chỉ tiêu vi sinh vật.
Sản xuất kháng thể thỏ kháng ovalbumin và tinh chế kháng thể (IgG) kháng ovalbumin
tài liệu hot trong mục này
tài liệu giúp tôi
Nếu bạn không tìm thấy tài liệu mình cần có thể gửi yêu cầu ở đây để chúng tôi tìm giúp bạn!
xem nhiều trong tuần
Giáo trình Quản trị học của Đại học kinh tế quốc dân
Tâm lý xã hội VÀ Hệ tư tưởng
Mẫu slide chủ đề âm nhạc
4 đề thi học sinh giỏi Toán lớp 2, có đáp án kèm theo
Tham khảo 12 bài tập nguyên lý thống kê có lời giải
Các hiệu ứng HTML cho trang web
yêu cầu tài liệu
Giúp bạn tìm tài liệu chưa có
×
