DANH MỤC TÀI LIỆU
Sản xuất bộ kit phát hiện gen halothan gồm có bộ kit tách chiết DNA và bộ kit PCR
1
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO
TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP.HCM
BỘ MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC
***000***
LƢƠNG QUÝ PHƢƠNG
SẢN XUẤT BỘ KIT TÁCH CHIẾT DNA VÀ BỘ KIT PCR
PHÁT HIỆN GEN HALOTHAN TRÊN HEO
Luận văn kỹ sƣ
Chuyên ngành: công nghệ sinh học
Thành phố Hồ Chí Minh
Tháng 8/2006
2
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO
TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP.HCM
BỘ MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC
***000***
SẢN XUẤT BỘ KIT TÁCH CHIẾT DNA VÀ BỘ KIT PCR
PHÁT HIỆN GEN HALOTHAN TRÊN HEO
Luận văn kỹ sƣ
Chuyên ngành: công nghệ sinh học
Giáo viên hƣớng dẫn: Sinh viên thực hiện:
PGS.TS. NGUYỄN NGỌC TUÂN Lƣơng Quý Phƣơng
PGS.TS. TRẦN THỊ DÂN Khóa: 2002-2006
Thành phố Hồ Chí Minh
Tháng 8/2006
3
MINISTRY OF TRAINING AND EDUCATION
HCMC NONG LAM UNIVERSITY
DEPARTMENT OF BIOTECHNOLOGY
***000***
PRODUCTION DNA EXTRACTION KIT AND PCR KIT TO
DETECT HALOTHAN GENE IN THE PIG
Engineer essay
Speciality: Biotechnology
Advisor: Student:
Assoc.Prof.Dr NGUYEN NGOC TUAN Luong Quy Phuong
Assoc.Prof.Dr TRAN THI DAN Course: 2002-2006
Ho Chi Minh city
August-2006
1
LỜI CẢM TẠ
Đầu tiên, con xin gửi đến ba lòng thành kính ghi ơn. Con kính chúc ba
sức khỏe dồi dào, con sẽ luôn phấn đấu để trở thành ngƣời ích cho hội để không
phụ công dƣỡng dục của ba má.
Chân thành gửi lời cảm ơn đến:
Ban giám hiệu trƣờng Đại Học Nông Lâm Tp. Hồ Chí Minh, ban chủ
nhiệm Bộ Môn Công Nghệ Sinh Học cùng tất cả các quý thầy đã tận
tụy truyền đạt những kiến thức quý báu cho tôi trong suốt quãng thời
gian học tập tại trƣờng.
Ban giám đốc cùng tập thể cán bộ nhân viên Trung m Phân Tích Thí
Nghiệm trƣờng Đại Học Nông m Tp. Hồ Chí Minh đã tạo điều kiện
thuận lợi cho tôi trong quá trình thực tập tốt nghiệp.
Tập thể cán bộ thú y và các chú tại lò mổ tập trung huyện Dĩ An, tỉnh
Bình Dƣơng đã nhiệt tình giúp đỡ tôi trong suốt quá trình lấy mẫu.
Em trân trọng biết ơn thầy Nguyễn Ngọc Tuân Trần Thị Dân đã tận tình
hƣớng dẫn, truyền đạt những kinh nghiệm quý báu tạo điền kiện thuận lợi cho em
trong thời gian thực tập tốt nghiệp.
Em gửi lời cảm ơn chân thành đến anh Nguyễn Văn Út chị Bùi Thị Thu
Trang đã giúp đỡ, động viên, chỉ dẫn tận tình trong lúc em tiến hành đề tài tốt nghiệp.
Cảm ơn tất cả bạn bè đã chia sẻ cùng tôi những khó khăn vất vả, vui buồn trong
quá trình học tập tại trƣờng và trong thời gian thực tập tốt nghiệp.
2
TÓM TẮT KHÓA LUẬN
Lƣơng Quý Phƣơng, Đại Học Nông Lâm TP. Hồ Chí Minh, tháng 8/2006,
“SẢN XUẤT BỘ KIT TÁCH CHIẾT DNA BỘ KIT PCR PHÁT HIỆN GEN
HALOTHAN TRÊN HEO”
Hƣớng dẫn khoa học: 1. PGS. TS. Nguyễn Ngọc Tuân
2. PGS. TS. Trần Thị Dân
Đề tài đƣợc thực hiện từ ngày 28-02-2006 đến ngày 28-07-2006 tại Trung Tâm
Phân Tích Thí Nghiệm Trƣờng Đại Học Nông Lâm TP. Hồ Chí Minh.
Gen halothan gen có những tác động quan trọng đến phẩm chất thịt, sự sinh
trƣởng sinh sản của heo. Do đó, sản xuất bộ kit tách chiết DNA bộ kit PCR để
phát hiện gen halothan trong đàn heo giống một cách nhanh chóng, tiện lợi, hiệu quả.
Quá trình thực hiện đề tài đạt đƣợc những kết quả sau:
1. Rút ngắn thời gian tách chiết DNA: Giảm thời gian mẫu trong dung dịch phân
giải tế bào từ 1 giờ còn 30 phút, giảm thời gian tủa DNA lần 1 từ 2 giờ còn 1 giờ,
không thực hiện giai đoạn tủa DNA lần 2, thực hiện việc hòa tan DNA trong TE trong
2 giờ thay vì để qua đêm. Độ tinh sạch hàm lƣợng DNA các thí nghiệm khác biệt
không ý nghĩa so với độ tinh sạch m lƣợng DNA tách chiết theo qui trình của
Lê Thị Thu Phƣơng (2004).
2. Thiết lập đƣợc bkit tách chiết DNA cho 100 mẫu xét nghiệm. Thành phần bộ kit
gồm 5 dung dịch. Độ tinh sạch, hàm lƣợng DNA hiệu quả phản ứng PCR của
DNA tách chiết theo bộ kit khác biệt không có ý nghĩa so với qui trình của Lê Thị Thu
Phƣơng (2004). Nhƣng thời gian thực hiện công việc tách chiết DNA theo bộ kit ngắn
hơn (5 giờ so với 24 giờ). thể dùng bộ kit để tách chiết DNA từ cơ, máu,
da. Bộ kit tách chiết DNA có thể bảo quản ở 4oC trong 3 tháng.
3. Thiết lập bộ kit PCR phát hiện gen halothan cho 10 phản ứng. Nồng độ glycerol
20% trong Master Mix 2X sau 1 tháng bảo quản 4oC cho hiệu quả PCR cao hơn so
với nồng độ glycerol 10% (100% so với 20%). Bảo quản Master Mix 2X hai nhiệt
độ 4oC và 10oC sau 1 tháng đều cho t lệ thành công phản ứng PCR là 100%.
4. Bộ kit PCR halothan phát hiện gen halothan với nồng đ DNA mẫu tối thiểu 1ng.
5. Bộ kit PCR halothan dùng để phát hiện gen halothan trên nhiều nguồn mẫu khác
nhau nhƣ cơ vân, máu, da.
3
MỤC LỤC
NỘI DUNG TRANG
Bìa ..................................................................................................................................... i
Trang tựa .......................................................................................................................... ii
Lời cảm tạ ...................................................................................................................... iii
Tóm tắt khóa luận ........................................................................................................... iv
Mục lục ............................................................................................................................ v
Danh sách các chữ viết tắt ............................................................................................. vii
Danh sách các bảng ..................................................................................................... viii
Danh sách các hình và biểu đồ ....................................................................................... ix
PHẦN I. MỞ ĐẦU .......................................................................................................... 1
1.1 Đặt vấn đề .................................................................................................................. 1
1.2 Mục tiêu và yêu cầu ................................................................................................... 2
1.2.1 Mục tiêu ............................................................................................................ 2
1.2.2 Yêu cầu ............................................................................................................. 2
PHẦN II. TỔNG QUAN TÀI LIỆU ............................................................................... 3
2.1 Khái quát về gen halothan và cách phát hiện ............................................................ 3
2.1.1 Gen halothan ..................................................................................................... 3
2.1.2 Ảnh hƣởng của gen halothan đến phẩm chất thịt ............................................. 3
2.1.3 Ảnh hƣởng của gen halothan đến sức sinh sản ................................................. 5
2.1.4 Những tác động tích cực của gen halothan ....................................................... 5
2.1.5 Cách phát hiện gen halothan ............................................................................. 6
2.2 Phƣơng pháp tách chiết DNA từ tế bào động vật và k thuật PCR .......................... 7
2.2.1 Phƣơng pháp tách chiết DNA từ tế bào động vật ............................................. 7
2.2.2 Định lƣợng DNA bằng quang phổ kế ............................................................... 8
2.2.3 Phƣơng pháp PCR ............................................................................................ 9
2.2.3.1 Nguyên tắc của phản ứng PCR .............................................................. 9
2.3 Enzym cắt giới hạn .................................................................................................. 11
2.4 Nguyên tắc tạo kit tách chiết DNA và kit PCR ....................................................... 13
2.4.1 Kit là gì ? ......................................................................................................... 13
2.4.2 Nguyên tắc tạo kit ........................................................................................... 13
2.4.3 Kit tách chiết DNA ......................................................................................... 13
2.4.4 Kit thực hiện phản ứng PCR ........................................................................... 14
2.5 Tình hình sản xuất kit trên thế giới và Việt Nam .................................................... 16
PHẦN III. NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU.................................... 17
3.1 Thời gian và địa điểm tiến hành .............................................................................. 17
3.2 Nội dung nghiên cứu ............................................................................................... 17
3.2.1 Tối ƣu hóa qui trình tách chiết DNA .............................................................. 17
3.2.2 Tạo kit tách chiết DNA .................................................................................. 17
3.2.3 Tạo kit PCR để phát hiện gen halothan trên heo ............................................ 17
3.3 Vật liệu và hóa chất ................................................................................................. 17
3.3.1 Nguồn mẫu chiết xuất DNA ........................................................................... 17
3.3.2 Các primer sử dụng ......................................................................................... 18
thông tin tài liệu
Thế kỷ 21 đƣợc đánh giá là thế kỷ của công nghệ sinh học, không thể phủ nhận những tác động to lớn và đầy tiềm năng của công nghệ này đến nhiều lĩnh vực của đời sống kinh tế xã hội nói chung và trong lĩnh vực chăn nuôi nói riêng. Một trong những kỹ thuật quan trọng của công nghệ sinh học là kỹ thuật PCR (polymerase chain reactions) với ƣu điểm phát hiện nhanh, đặc hiệu đã hỗ trợ cho các nhà nghiên cứu có nhiều thuận lợi trong công tác chọn tạo giống vật nuôi, rút ngắn thời gian chọn lọc tính trạng di truyền mong muốn. Bên cạnh đó kết quả của kỹ thuật PCR còn là vật liệu cho nhiều nghiên cứu sâu hơn …. Ở nước ta hiện nay, phần lớn các kết quả thu đƣợc từ việc áp dụng kỹ thuật này chỉ dừng lại ở mức độ nghiên cứu trong phòng thí nghiệm, chƣa có nhiều ứng dụng rộng rãi trong thực tế sản xuất, thậm chí trong phòng thí nghiệm thì việc áp dụng kỹ thuật này cũng gặp không ít trở ngại. Có nhiều nguyên nhân để lý giải vấn đề này.
Mở rộng để xem thêm
xem nhiều trong tuần
yêu cầu tài liệu
Giúp bạn tìm tài liệu chưa có

LÝ THUYẾT TOÁN


×