1.6.1. Tá chất ................................................................................................. 15
1.6.2. Quy trình gây miễn dịch cơ bản tạo kháng thể đa dòng ........................ 16
1.6.3. Tinh chế kháng thể IgG ....................................................................... 17
1.6.3.1. Kết tủa IgG từ huyết thanh hoặc dịch sinh vật khác bằng
(NH
4
)
2
SO
4
............................................................................................ 18
1.6.3.2. Tinh chế IgG nhờ sắc kí trao đổi ion
.................................................. 18
1.6.3.3. Tinh chế IgG nhờ cột ái lực protein A- hoặc protein G-sepharose
4B
......................................................................................................... 19
1.6.4. Kiểm tra nồng độ và độ sạch của huyết thanh sau tinh chế ................... 20
2.1. THỜI GIAN VÀ ĐỊA ĐIỂM NGHIÊN CỨU ............................................. 22
2.2. VẬT LIỆU .................................................................................................. 22
2.2.1. Sinh phẩm............................................................................................. 22
2.2.2. Súc vật thí nghiệm ................................................................................ 22
2.2.3. Hoá chất và dung dịch chuẩn ................................................................ 22
2.2.4. Thiết bị ................................................................................................. 23
2.2.5. Dụng cụ ................................................................................................ 24
2.3. PHƯƠNG PHÁP ........................................................................................ 24
2.3.1. Miễn dịch thỏ thu huyết thanh kháng ovalbumin .................................. 24
2.3.2. Xác định hiệu giá kháng thể thỏ kháng ovalbumin bằng phương pháp
khuyếch tán miễn dịch kép (Ouchterlony) ...................................................... 26
2.3.2.1. Nguyên tắc
............................................................................................ 26
2.3.2.2. Tiến hành
.............................................................................................. 26
2.3.3. Tinh chế kháng thể kháng ovalbumin bằng cột HiTrap protein G HP.... 27
2.3.3.1. Tinh chế
............................................................................................... 27
2.3.3.2. Phương pháp điện di SDS-PAGE kiểm tra độ sạch của huyết
thanh sau tinh chế
................................................................................ 28
2.3.4. Phương pháp điện di miễn dịch đối lưu ................................................. 30
2.3.5. Xây dựng phương pháp ELISA định lượng ovalbumin trong vacxin
cúm A/H5N1. ................................................................................................. 31
2.3.5.1. Nguyên lý
............................................................................................. 31
2.3.5.2. Các bước tiến hành
.............................................................................. 31
2.3.6. Thẩm định phương pháp ....................................................................... 33
2.3.6.1. Xây dựng đường chuẩn và độ nhạy của phản ứng
............................. 33
2.3.6.2. Xác định độ chính xác của phương pháp
........................................... 33